残留（Carryover）是指前一个样品残留在分析仪器上的残留物而引起的测定浓度的变化。根据《生物样品定量分析方法验证指导原则》（中国药典，2020年版第四部9012）、《Bioanalytical  Method Validation M10》(ICH，2019)和《Guidance for Industry: Bioanalytical Method Validation》(FDA，2018 Final)等法规及指导原则，残留考察方法是通过在ULOQ浓度样品之后分析空白样品，其可接受标准为在ULOQ之后的空白样品中残留应不超过LLOQ样品中待测物响应的20%及内标响应的5%。残留问题可能出现在方法开发验证、样本测定或方法转移等时候，若不及时发现并采取措施使之符合可接受标准，那么它会对试验样品测定结果产生干扰，从而影响实验数据的准确性，因此残留可控化显得尤为重要。

一般来说，残留主要分为以下3类：

1、经典残留，主要与进样溶剂在仪器系统中的死体积有关。

这种残留多数来源于仪器设计本身。仪器系统一般由多个不同部件组合而成，因此各个部件连接处存在一定的空隙，当进样溶剂被注入至仪器系统中时，进样溶剂会在各个空隙处有所 “停留”，“停留”下来的样品会在后续进样时出现。特别是当仪器系统经历高压环境后，这些空隙有可能变大，从而影响残留的可控性。因此在试验开展前，应检查仪器状态，适时更换/拆卸/冲洗进样阀、定量环、进样针、针座、连接头、在线过滤器等部件，对仪器做好日常维护，确保仪器状态良好。

2、吸附残留，主要与仪器管路、色谱柱等有关。

吸附残留在分析中较为常见，吸附残留与分析物的结构和理化特性紧密相关，因此在试验开展前，应充分了解分析物的pKa、LogP和LogD等参数，从而迅速的筛选到适合的色谱柱，如对于强极性化合物可以采用HILIC亲水型色谱柱，Amide型色谱柱是糖类分析的理想色谱柱，五氟苯基柱广泛应用于核酸分析中等等。除此之外，还可以考虑加大洗针液的体积、延长洗针时间或优化洗针程序，如将冲洗进样针外壁改为冲洗进样针内、外壁等。还可以根据分析物的性质来调整洗针液的组成，比如脂溶性化合物在弱极性洗针液中洗脱效果更好，酸性化合物在碱性洗针液中洗脱效果更好；或者考虑增加有机溶剂在进样溶剂中的比例，从而降低进样溶剂的极性；或者考虑将PEEK管线改为吸附作用小的不锈钢管线等等。

3、洗脱残留，主要与进样溶剂的不完全洗脱有关。

对于这种残留，可以考虑优化洗脱程序，比如将等度洗脱改为梯度洗脱，增加洗脱平衡时间和减缓流动相变换速率，这样有助于增强洗脱能力，有效地将进样溶剂中各种极性的化合物洗脱完全，或者在反向色谱系统中增加有机相的起始比例、延长高比例有机相洗脱时间，有助于减弱残留影响；或者调节流动相的pH值、更换流动相种类等等。

当残留不可避免时，指导原则指出在分析时试验样品不能随机进样，应采用包括但不限于以上种种措施，比如根据血浆药物浓度—时间对应关系将高浓度样品优先进样，或者在高浓度样品之后加进一针空白样品，甚至在某些条件允许的情况下将LLOQ提高或ULOQ降低，使之在方法开发中予以解决并通过方法学验证，且在样品分析时应用这些措施，以确保残留不影响分析方法的准确度和精密度，保证数据的真实性、可靠性。