中耳炎是发生在中耳组织结构中的炎性病变，分为分泌性中耳炎、化脓性中耳炎、中耳胆脂瘤和特殊类型中耳炎4大类，该病不仅可导致注意力、认知感和听力下降，还可引起颅内外并发症进而危及生命^[1-3]。

     近年来，随着临床上糖皮质激素和广谱抗菌药物的普遍使用，条件致病菌感染率不断增加，真菌检出率逐渐升高，真菌性中耳炎逐渐走入大众视野^[4]。

1.真菌性中耳炎

     真菌性中耳炎是以真菌为致病菌的中耳炎性疾病，《中耳炎临床分类和手术分型指南（2012）》首次出现这一分类，并将其归属至特殊类型中耳炎^[3]。其与慢性化脓性中耳炎的临床症状极其相似，常被误诊为普通细菌性中耳炎，对其进行抗生素治疗，而广谱抗生素会抑制细菌簇，使真菌迅速繁殖，加重病情，为临床诊治带来困难^[5,6]。

2.造模方式

     SD大鼠50只，雌雄各半，随机分为正常对照组、空白注射组、潮湿组、免疫抑制组和潮湿+免疫抑制组，每组10只。

     实验开始1 ~ 3 d，潮湿组每日对大鼠右侧耳部滴入2次0.9%氯化钠注射液，免疫抑制组每日经口灌胃给予醋酸地塞米松药液，潮湿+免疫抑制组每日对大鼠右侧耳部滴入两次0.9%氯化钠注射液的同时每日经口灌胃给予醋酸地塞米松药液。

     第4天，各组麻醉后，潮湿组、免疫抑制组和潮湿+免疫抑制组将1×1010 CFU/mL白色念珠菌悬液经鼓膜穿刺注入到大鼠右侧中耳腔，每只50 μL，空白注射组大鼠注入等体积空白培养液，正常对照组不做任何处理；每日对潮湿组、潮湿+免疫抑制组大鼠右侧耳部滴入2次0.9%氯化钠注射液，连续观察15天。

3.不同时间大鼠中耳白色念珠菌定植变化

     取大鼠耳道分泌物进行菌种培养并确认菌种定植，白色念球菌注入后的第5天、第10天、第15天，正常对照组和空白注射组大鼠耳道分泌物培养鉴定均无明显菌落生长；潮湿组、免疫抑制组和潮湿+免疫抑制组的大鼠耳道分泌物经培养鉴定均为白色念珠菌且没有发现其他菌落，培养的白色念珠菌呈呈乳白色，表面光滑有浓酵母气味，形成菌落。

     大鼠耳道分泌物经过革兰氏染色后，可见成群革兰染色阳性的卵圆形孢子和假菌丝。如图3所示，造模后的第5、10和15天中，潮湿+免疫抑制组大鼠耳道分泌物染色均出现白色念珠菌，且随着时间的延长而增加；而免疫抑制组和潮湿组大鼠的耳道分泌物中均发现白色念珠菌，随着时间延长，白色念球菌数量逐渐减少。

 （一般培养法）

（革兰氏染色法）

4.不同时间大鼠大鼠中耳病理变化

     大鼠中耳HE染色结果所示，正常对照组和空白注射组大鼠在潮湿组（白念）大鼠中耳黏膜有充血、出血、水肿、少量炎性细胞浸润现象；在免疫抑制组（白念）大鼠中耳出现黏膜充血、水肿、大量炎性细胞浸润；在潮湿+免疫抑制组（白念）大鼠中耳黏膜充血、水肿、大量炎性细胞浸润。

5.注意事项

     综合实验结果可清晰发现白色念珠菌在潮湿+免疫抑制条件下的模型建立方面效果更佳，提示两方面因素：一方面是由于白色念珠菌属于机会性和致病性真菌，在机体免疫功能低下时引起浅表感染和侵袭性感染的频率更高；另一方面是由于白色念珠菌在干燥环境的存活率很差，而在潮湿环境中存活时间更长。

6.参考文献

[1]Wald ER, DeMuri GP. Antibiotic recommendations for acute otitis media and acute bacterial sinusitis: conundrum no more [J]. Pediatr Infect Dis J, 2018, 37(12): 1255-1257.

[2]肖聪聪, 李博, 郑体花, 等. 中耳炎小鼠模型的听力学特点 [J]. 中国老年学杂志, 2019, 39(22): 5581-5585.

[3]孙建军, 刘阳. 中耳炎临床分类和手术分型指南(2012)解读 [J]. 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志, 2013, 48(1): 5.

[4]周详, 谢鼎俊, 姜顺民, 等. 聚维酮碘治疗化脓性中耳炎真菌感染及对听力影响研究 [J]. 中华医院感染学杂志, 2019, 29(14): 2194-2197, 2211.

[5]刘明贺. 真菌性中耳炎及相关变应原研究 [D]. 荆州: 长江大学; 2017.

[6]曾勇超. 真菌性中耳炎的发病危险因素分析与护理干预对策 [J]. 护理实践与研究, 2019, 16(5): 97-98.